vietEDU đào tạo LCMSMS phân tích kháng sinh thuỷ sản trên hệ máy LCMSMS hãng SCIEX – Mỹ 

ĐÀO TẠO SẮC KÝ QUANG PHỔ THỰC CHIẾN vietEDU^® 

vietEDU đào tạo LCMSMS phân tích kháng sinh thuỷ sản trên hệ máy LCMSMS hãng SCIEX – Mỹ

 

I. NỘI DUNG ĐÀO TẠO

02 ngày	Đào tạo lý thuyết thiết bị và phân tích: –       Nguyên lý hoạt động và phân tích đối với LCMSMS –       Lý thuyết, ý nghĩa các thông số cài đặt cho LC và MS –       Đào tạo quy trình xử lý mẫu và quy trình phân tích chỉ tiêu kháng sinh –       Đào tạo thẩm định phương pháp trong sắc ký (phục vụ đánh giá ISO 17025)	–      Kỹ thuật khách hàng và vietEDU	Thời gian thực hiện có thể thay đổi tùy thực tế
02 ngày	Đào tạo vận hành máy: –       Hướng dẫn bật và tắt hệ thống –       Cài đặt thông số LC/MSMS –       Hướng dẫn quy trình phân tích và chạy mẫu –       Xử lý kết quả –        Bảo trì thông thường –       Xử lý sự cố thông thường	–      Kỹ thuật khách hàng và vietEDU-	Thời gian thực hiện có thể thay đổi tùy thực tế
Dự kiến 2 tuần (thời gian cụ thể phụ thuộc dụng cụ và hóa chất xử lý mẫu)	Phát triển phương pháp: –       Phương pháp chạy LC và MS/MS –       Quy trình thao tác chuẩn (SOP) –       Hồ sơ xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp    Đào tạo cho người sử dụng về ứng dụng: –       Hướng dẫn xử lý mẫu –       Hướng dẫn phân tích mẫu trên thiêt bị –       Hướng dẫn xử lý kết quả trên phần mềm.		Thời gian thực hiện có thể thay đổi tùy thực tế

II. TRIỂN KHAI PHÂN TÍCH KHÁNG SINH TRÊN NỀN MẪU THỦY SẢN

1. Chỉ tiêu phân tích và ngưỡng nồng độ cần đạt được:

Nhóm	Nhóm chỉ tiêu	MRL (ug/Kg)
Quinilone	Ciprofloxacine, Enrofloxacine, Norfloxacine, Ofloxacine	1.0
Nhóm Sulfalamide	Sulfachloropyridazine Sulfadiazine Sulfamethoxazole Sulfamethazine Sulfadimethoxine	1
Nhóm Triphenyl Methane	MalachiteGreen Leuco Malachite Green Crystal violet Leuco Crystal violet	0.5
Nhóm Tetracycline	Doxycycline	5
	Oxytetracycline
	Tetracycline
Chloramphenicol	Chloramphenicol	0.1
Nhóm Nitrofuran	AOZ. AMOZ. AHD. SEM	0.1

2. Kế hoạch thực hiện:

Thời gian	Công việc thực hiện	Kết quả đạt được	Báo cáo
1 ngày	Thực hiện bước làm giàu mẫu bằng phương pháp thổi khô mẫu	+ Đường chuẩn các chất có hệ số tương quan R2 ≥0.99 + Tính ngược nồng độ các điểm chuẩn có độ đúng trong khoảng 20% + Định tính bằng tỉ lệ ion MRM đạt.	Cập nhật hằng ngày trên nhóm zalo chung dự án
01 ngày	Thực hiện phê duyệt phương pháp cho nhóm nitrofuran	Tính toán các thông số phương pháp: + LOQ, LOD +Độ lặp + Độ đúng + Độ không đảm bảo đo	Cập nhật hằng ngày trên nhóm zalo chung dự án
1 ngày	Thực hiện phê duyệt phương pháp cho nhóm Kháng sinh Quinolone, Tetracycline, Triphenyl methan, Sulfalamide, CAP	Tính toán các thông số phương pháp: + LOQ, LOD +Độ lặp + Độ đúng + Độ không đảm bảo đo	Cập nhật hằng ngày trên nhóm zalo chung dự án
1 ngày	Ngày dự phòng

3. Nội dung công việc:

• • Phân tích nhóm chất Nitrofuran:

• Phạm vi áp dụng: Nền mẫu thủy hải sản
• Phương pháp tham khảo: US. FDA -CAM C-011 (2019) và có chỉnh sửa. (ghi chú, bước tạo dẫn xuất bằng kỹ thuật vi song được chuyển thành kỹ thuật siêu âm)

Tóm tắt phương pháp:

Bước 1: Cân 2 g mẫu đã đồng nhất vào ống Falcon 50 mL

Bước 2: Thêm:

+ 10 uL nội chuẩn có nồng độ 100 ng/mL vào các ống chuẩn và mẫu.

+ 200 uL dung dịch 100 mM 2-nitrobenzaledhyde vào các ống chuẩn và mẫu

+ 10 mL HCl 0.125 M

=> Vorttex mẫu 30 giây

Bước 3: Siêu âm 20 phút tại nhiệt độ 50 ⁰C

Bước 4: Thêm:

+ 0.5 mL NaOH 2 M

+  4 g muối MgSO4, 1 g NaCL

+ 5 mL Ethylacetate

=> Vortex mẫu trong 60 giây

Bước 5: Hút 2.5 mL ethyl acetate, thổi khô hoàn toàn bằng khí Nito.

Bước 6: Hòa tan lại mẫu bằng 0.5 mL dung dịch ACN: H2O (0.1% FA) tỉ lệ 2: 8 v/v, lọc và tiêm mẫu vào hệ thống LC-MS/MS.

• Phân tích nhóm chất Kháng Sinh Quinolin, Triphenyl Methane, Sulfalamide, và Tetracycline

• Phạm vi áp dụng: Nền mẫu thủy hải sản
• Phương pháp tham khảo: AOAC 2020.04.

Tóm tắt phương pháp:

Bước 1: Cân 2 g mẫu đã đồng nhất vào ống Falcon 50 mL

Bước 2: Thêm:

+ 10 uL nội chuẩn có nồng độ 100 ng/mL vào các ống chuẩn và mẫu.

+ 5 mL H2O chứa 0.1 % acid formic => Vortex 30 giây

+ 5 mL Acetonitril  => Vortex 60 giây

+ 4 gam Na2SO4, 1 g NaCl, lắc đều mẫu và vortex 60 giây.

Bước 3: Hút 2.5 mL Acetonitrile vào ống 15 mL, thổi khô hoàn toàn bằng khí Nito

Bước 4: Hòa tan lại mẫu bằng 0.5 mL dung dịch ACN: H2O (0.1% FA)  tỉ lệ 2: 8 v/v, lọc và tiêm mẫu vào hệ thống LC-MS/MS

• Dựng đường chuẩn:
  • Dựng đường chuẩn cho Nhóm nitrofuran:
• Chuẩn gốc AOZ, AMOZ, AHD và SEM có nồng độ 10 µg/mL
• Nội chuân AOZ D4 và AMOZ D5 có nồng độ 10 µg/mL

+ Chuẩn trung gian 1 (TG1) 1 µg/mL : Hút 100 uL các chất chuẩn đơn AOZ, AMOZ, AHD và SEM và them MeOH tới đủ 1 mL.

+ Chuẩn trung gian 2 (TG2) 100 ng/mL : Hút 100 uL từ chuẩn TG1 them MeOH tới đủ 1 mL

+ Chuẩn trung gian 2 (TG2) 10 ng/mL : Hút 100 uL từ chuẩn TG2 them MeOH tới đủ 1 mL

+ Nội chuẩn trung gian: Hút 10 µL nội chuẩn gốc, them MeOH tới đủ 1 mL.

• Chuẩn bị 9 ống mẫu blank đã cân 2 gam mẫu vào mỗi ống.

Bảng 1: Pha dãy đường chuẩn cho các chất AOZ, AMOZ, AHD và SEM

Điểm chuẩn	STD 1	STD 2	STD 3	STD 4	STD 5	STD 6	STD 7	STD 8
M mau (g)	2	2	2	2	2	2	2	2
Hut tu chuan	TG3	TG3	TG3	TG2	TG2	TG2	TG2	TG2
V hut (uL)	10	20	40	10	20	40	100	200
Lượng chất (ng/g)	0.05	0.1	0.2	0.5	1	2	5	10

Đường chuẩn dựng trên thiết bị::

a./ Đường chuẩn AOZ:

b./ Đường chuẩn AMOZ

c./ Đường chuẩn AHD

d./ Đường chuẩn SEM

3.3.2 Dựng đường chuẩn cho nhóm Kháng Sinh Quinolin, Triphenyl Methane, Sulfalamide, và Tetracycline:

Chuẩn gốc và pha các chuẩn trung gian
Chuẩn gốc	C ug/mL	C trung gian (TG1) µg/mL	V (uL)	C trung gian (TG2) µg/mL
Ciprofloxacine	10	1	100	0.1
Enrofloxacine	10	1	100	0.1
Ofloxacine	10	1	100	0.1
Norfloxacine	10	1	100	0.1
MG	10	0.5	50	0.05
Leuco MG	10	0.5	50	0.05
CV	10	0.5	50	0.05
Leuco CV	10	0.5	50	0.05
Doxy	100	10	100	1
Oxy		10		1
Tetracycline		10		1
Sulfachloropyridazine	10	1	100	0.1
Sulfadiazine		1		0.1
Sulfamethoxazole		1		0.1
Sulfamethazine		1		0.1
Sulfadimethoxine		1		0.1
CAP	10	0.1	10	0.01
			V tong 1 mL
Nội chuẩn và pha nội chuẩn trung gian
Chất	C (ppm)	C IS ppm	V hut (uL)	C trong mau ppb
Enrofloxacin_D5	10	1	100	5
MalachiteGreen D6	10	1	100	5
Leuco Malachite Green D5_IS	10	1	100	5
demeclocycline	100	10	100	50
Sulfamethoxazole D4	10	1	100	5
CAP D5	10	0.1	10	0.5

Bảng 2: Pha dãy đường chuẩn cho các chất AOZ, AMOZ, AHD và SEM

• Chuẩn bị 9 ống mẫu blank đã cân 2 gam mẫu vào mỗi ống.

Điểm chuẩn	STD 1	STD 2	STD 3	STD 4	STD 5	STD 6	STD 7	STD 8
M mau (g)	2	2	2	2	2	2	2	2
Hut tu chuan	TG2	TG2	TG2	TG1	TG1	TG1	TG1	TG1
V hut (uL)	10	20	40	10	20	40	100	200

Chỉ tiêu	STD 1	STD 2	STD 3	STD4	STD 5	STD 6	STD7	STD 8
Đơn vị	µg/Kg	µg/Kg	µg/Kg	µg/Kg	µg/Kg	µg/Kg	µg/Kg	µg/Kg
Ciprofloxacin_1	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Ciprofloxacin_2	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Enrofloxacin_1	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Enrofloxacin_2	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Enrofloxacin_D5 1	1	1	1	1	1	1	1	1
Enrofloxacin_D5 2	1	1	1	1	1	1	1	1
Ofloxacin_1	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Ofloxacin_2	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Norfloxacin_1	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Norfloxacin_2	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
MalachiteGreen_1	0.25	0.5	1.25	2.5	5	12.5	25	50
MalachiteGreen_2	0.25	0.5	1.25	2.5	5	12.5	25	50
MalachiteGreen_ IS	1	1	1	1	1	1	1	1
MalachiteGreen_ IS 2	1	1	1	1	1	1	1	1
MalachiteGreen_ IS 3	1	1	1	1	1	1	1	1
Leuco Malachite Green_1	0.25	0.5	1.25	2.5	5	12.5	25	50
Leuco Malachite Green_2	0.25	0.5	1.25	2.5	5	12.5	25	50
Leuco Malachite Green_IS	1	1	1	1	1	1	1	1
Leuco Malachite Green_is2	1	1	1	1	1	1	1	1
Crystal violet_1	0.25	0.5	1.25	2.5	5	12.5	25	50
Crystal violet_2	0.25	0.5	1.25	2.5	5	12.5	25	50
Leuco Crystal violet_1	0.25	0.5	1.25	2.5	5	12.5	25	50
Leuco Crystal violet_2	0.25	0.5	1.25	2.5	5	12.5	25	50
Doxycycline_1	5	10	25	50	100	250	500	1000
Doxycycline_2	5	10	25	50	100	250	500	1000
Oxytetracycline_1	5	10	25	50	100	250	500	1000
Oxytetracycline_2	5	10	25	50	100	250	500	1000
Tetracycline_1	5	10	25	50	100	250	500	1000
Tetracycline_2	5	10	25	50	100	250	500	1000
demeclocycline	1	1	1	1	1	1	1	1
demeclocycline 1	1	1	1	1	1	1	1	1
Sulfachloropyridazine_1	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Sulfachloropyridazine_2	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Sulfadiazine_1	2	4	10	20	40	100	200	400
Sulfadiazine_2	2	4	10	20	40	100	200	400
Sulfamethoxazole_1	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Sulfamethoxazole_2	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Sulfamethoxazole_ IS 1	1	1	1	1	1	1	1	1
Sulfamethoxazole_ IS 2	1	1	1	1	1	1	1	1
Sulfamethazine_1	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Sulfamethazine_2	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Sulfadimethoxine_1	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Sulfadimethoxine_2	0.5	1	2.5	5	10	25	50	100
Chloramphenicol_1	0.05	0.1	0.25	0.5	1	2.5	5	10
Chloramphenicol_2	0.05	0.1	0.25	0.5	1	2.5	5	10
Chloramphenicol_D5	1	1	1	1	1	1	1	1

1./ Đường chuẩn Ciprofloxacine:

2./ Đường chuẩn Enrofloxacine:

3./ Đường chuẩn Ofloxacin:

4./ Đường chuẩn Norfloxacine:

5./ Đường chuẩn MG:

6./ Đường chuẩn Leco MG:

7./ Đường chuẩn CV:

8./ Đường chuẩn Doxy:

9./ Đường chuẩn oxytetracycline:

10./ Đường chuẩn Tetracycline:

11./ Đường chuẩn nhóm Sulfa:

UÝ KHÁCH CÓ NHU CẦU ĐẠO TẠO THỰC CHIẾN SẮC KÝ / QUANG PHỔ… – VUI LÒNG LIÊN HỆ:

ĐÀO TẠO SẮC KÝ – QUANG PHỔ THỰC CHIẾN vietEDU®
Địa chỉ	HCM Office:	Số N36, Đường số 11, Phường Tân Thới Nhất,  Quận 12, Tp. Hồ Chí Minh
	Hà Nội Office:	Tầng 1, Toà nhà Intracom Building, 33 Đường Cầu Diễn, Quận Bắc Từ Liêm, Tp. Hà Nội
	Đà Nẵng Office:	Số 10, Đường Lỗ Giáng 05, Phường Hoà Xuân, Quận Cẩm Lệ, Tp. Đà Nẵng
Hotline	1900 066 870 | 0785 664422
Email	info@viet-edu.com.vn
Website	https://www.vietcalib.vn| http://www.viet-edu.com.vn